一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?nbsp;

1、了解紙上層析的原理、應(yīng)用以及中學(xué)化學(xué)課本引進(jìn)紙上層析實(shí)驗(yàn)的意義。 2、探索做好紙上層析演示實(shí)驗(yàn)的技術(shù)關(guān)鍵，掌握用紙上層析分離混合物的方法。 二、實(shí)驗(yàn)原理 

紙上層析是用濾紙作為支持劑（載體）的一種色層分析法，這種方法的基本原理一般認(rèn)為主要是利用混和物中各組分在流動(dòng)相和固定相間的分配比的不同而使之分離。 

在本實(shí)驗(yàn)中，以濾紙上吸附的水為固定相（濾紙纖維常能吸附20％左右的水），有機(jī)溶劑如正丁醇或乙醇（都含有一定比例的水）等為流動(dòng)相，酚酞、甲基橙混和物或紅、藍(lán)墨水混和物為層析試樣。把試樣點(diǎn)在濾紙的原點(diǎn)位置上，當(dāng)流動(dòng)相溶劑在濾紙的毛細(xì)管作用下，連續(xù)不斷地沿著濾紙前進(jìn)通過(guò)原點(diǎn)時(shí)，試樣中各組分便隨著流動(dòng)相溶劑向前移動(dòng)，并在流動(dòng)相和固定相溶劑之間連續(xù)發(fā)生一次又一次的分配。結(jié)果，分配比較大的物質(zhì)移動(dòng)速度較快，移動(dòng)的距離較遠(yuǎn)；分配比較小的物質(zhì)移動(dòng)速度慢，移動(dòng)的距離較近。這樣，便把試樣中各組分分開聚集在濾紙的不同位置上。這種分離過(guò)程叫展開。因此，流動(dòng)相溶劑又叫做展開劑。 

當(dāng)分離的物質(zhì)是有色的，如甲基橙，層析后在濾紙上可以直接看出它的色斑。當(dāng)分離的是無(wú)色的物質(zhì)，如酚酞，就必須用顯色劑使之顯色。無(wú)色的酚酞可以用氨水使之顯紅色，所用的氨水就是顯色劑。  

紙上層析可用于化學(xué)性質(zhì)相近的混和物的分離，特別適宜于微量物質(zhì)的分離和鑒別。而且使用的儀器簡(jiǎn)單，操作比較容易，重現(xiàn)性好。目前，紙上層析已運(yùn)用到有機(jī)化學(xué)、無(wú)機(jī)化學(xué)、生物化學(xué)及生理學(xué)的定性、定量分析中。例如利用紙上層析法使蛋白質(zhì)所包含的幾十種氨基酸在一張濾紙上全部分離開；又如在稀有元素、稀土元素、放射性元素和核裂解產(chǎn)物等的分離和鑒定上，也用到紙上層析法，都有較好的效果。 

為了擴(kuò)大學(xué)生的眼界，提高學(xué)生的興趣，在中學(xué)化學(xué)教材中引入了紙上層析實(shí)驗(yàn)，使學(xué)生初步了解用紙上層析分離物質(zhì)的方法，但只要求做出定性的結(jié)果。 三、實(shí)驗(yàn)用品 

儀器： 大試管（30mm×200mm）（帶橡皮塞） 5支 移液管（10ml） 2支 大試管架（大孔） 1個(gè) 培養(yǎng)皿（直徑8cm） 5只 玻璃毛細(xì)管（長(zhǎng) 8cm） 2支 剪刀（公用）小刀（公用）  

藥品：濃氨水 

酚酞、甲基橙混和溶液，配制法是取甲基橙、酚酞各0.1g，溶于10ml60％乙醇中。 

氨水的正丁醇飽和溶液，配制法是先用濃氨水配制成2∶8稀氨水（2ml濃氨水∶8 ml蒸餾水）40ml，慢慢注入20ml正丁醇中，充分振蕩。靜置后液體分為兩層，上層即氨水的正丁醇飽和溶液。 

乙醇與氨水的混和溶液，配制法是用乙醇與1mol/L氨水按體積比2∶1（2 ml乙醇∶1ml1mol/L氨水）混和。 

材料： 濾紙，圓形（直徑9cm）慢速、中速、快速定性濾紙各5張；長(zhǎng)條形層析濾紙和中速定性濾紙各5條。 鉛筆（公用）。 小鐵釘。  四、實(shí)驗(yàn)步驟  

本次實(shí)驗(yàn)使用一種不同的層析混和物（酚酞和甲基橙混和溶液），兩種不同的展開劑，兩種不同的展開方法和四種不同規(guī)格的濾紙作支持劑，進(jìn)行對(duì)比實(shí)驗(yàn)。要注意掌握紙上層析的技術(shù)，總結(jié)本實(shí)驗(yàn)成功的條件，探索改進(jìn)實(shí)驗(yàn)的方法。  

1、以氨水的正丁醇飽和溶液作展開劑（氨是顯色劑。本實(shí)驗(yàn)把顯色劑加在展開劑里，配成氨水的正丁醇飽和溶液，目的是為了簡(jiǎn)化操作手續(xù)，便于使學(xué)生直接觀察實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象）。 

（1）利用長(zhǎng)條形濾紙進(jìn)行層析（上行展開），分別利用長(zhǎng)條形層析濾紙和中速定性濾紙按下列操作進(jìn)行試驗(yàn)并對(duì)比試驗(yàn)的效果。 

I、準(zhǔn)備：取一支帶橡皮塞（塞子底端中間切有一條縫隙）的清潔、干燥的大試管（30mm×200mm）。配合大試管的內(nèi)徑和管長(zhǎng)，裁取一長(zhǎng)條濾紙，紙條的寬度比試管的內(nèi)徑略窄（約24mm）；長(zhǎng)度按塞子底端到近試管底的距離（約180mm）。（裁取時(shí)，要求濾紙的紙紋均勻一致而且沒有斜紋；紙面要清潔而平整；紙邊要剪齊而無(wú)紙毛）。 

ii 、點(diǎn)樣：在準(zhǔn)備好的長(zhǎng)條形濾紙的一端距端邊約2 cm處的正中，用鉛筆畫一個(gè)小“×”號(hào)表示原點(diǎn)的位置，于此“×”號(hào)處用玻璃毛細(xì)管點(diǎn)上酚酞和甲基橙的混和溶液試樣，點(diǎn)好的試樣斑點(diǎn)的直徑以不超過(guò)0.4cm為宜。 

Iii、展開：用移液管量取約10ml氨水的正丁醇飽和溶液，小心地將溶液轉(zhuǎn)移到大試管中（注意：勿使溶液濺到試管上部?jī)?nèi)壁）。將點(diǎn)好試樣的條形濾紙的另一端夾在橡皮塞底端中間的縫隙里，然后小心地將濾紙條伸入盛有展開劑的大試管中，塞上橡皮塞，使濾紙垂直而兩側(cè)不接觸試管內(nèi)壁（否則會(huì)造成展開劑不按水平線平行上升，影響展開效果）；濾紙條的下端浸入溶液液面下約1cm（勿使試樣斑點(diǎn)浸入溶液之中），如P15圖2-3。塞好橡皮塞（注意密閉?。┖?，將大試管靜置于試管架上，觀察現(xiàn)象。記錄酚酞與甲基橙完全分離開的時(shí)間，以及二者分開后的顏色與相對(duì)位置（前后）。 

iv 、結(jié)束：取出濾紙條，立即用鉛筆在展開劑到達(dá)的前沿處作一記號(hào)。 如果酚酞顯色不鮮明，這是因展開劑上升到一定高度，水分減少，NH3在無(wú)水情況下不能使酚酞顯紅色之故?？蓪⑷〕龅臑V紙條用水蒸氣熏片刻，然后再用濃氨水熏一下；或?qū)V紙條倒置（展開劑前沿向下），在展開劑前沿處滴少許氨水；或事先把濾紙條上部（要控制好上部位置）用水潤(rùn)濕，待酚酞隨正丁醇上升到被水潤(rùn)濕處則可顯紅色。 #p#分頁(yè)標(biāo)題#e#

（2）利用圓形濾紙進(jìn)行層析（環(huán)形展開或徑向展開），分別用圓形慢速、中速、快速定性濾紙按下列操作進(jìn)行試驗(yàn)，并對(duì)比試驗(yàn)的效果。 

I、準(zhǔn)備：選好所需規(guī)格的圓形濾紙，濾紙的直徑應(yīng)比所用的培養(yǎng)皿（或其它淺皿）的直徑略大。再用寬1cm左右的濾紙條卷成直徑為0.15—0.2cm的濾紙芯。 

Ii、點(diǎn)樣：取一張選好的（直徑約9cm）圓形濾紙，在圓心位置上用玻璃毛細(xì)管點(diǎn)上酚酞和甲基橙的混和溶液，點(diǎn)好的試樣斑點(diǎn)直徑約0.5cm，晾干。 

Iii、展開：在試樣斑點(diǎn)的中心位置上用小鐵釘穿一個(gè)小圓孔，小圓孔的直徑約0.15—0.2 cm。取一段長(zhǎng)約1.5cm的濾紙芯，垂直插入小圓孔中，使濾紙芯的上端稍冒出濾紙平面。量取約10ml氨水的正丁醇飽和溶液，注入直徑為8 cm的培養(yǎng)皿中，將準(zhǔn)備好的圓形濾紙蓋在培養(yǎng)皿上，使紙芯下端浸入展開劑中，再罩上培養(yǎng)皿蓋，如P18圖2-6。靜置，觀察所發(fā)生的現(xiàn)象，記錄觀察到的現(xiàn)象和酚酞與甲基橙完全分離的時(shí)間。 

Iv、結(jié)束、取下圓形濾紙，其后的操作同（一）-1-（1）-iv。 2、以乙醇和氨水的混和溶液作展開劑（氨是顯色劑）。 

（1）利用長(zhǎng)條濾紙進(jìn)行層析（上行展開） 分別用長(zhǎng)條形層析濾紙和中速定性濾紙進(jìn)行試驗(yàn)，并對(duì)比試驗(yàn)的效果。除更換展開劑外，操作方法同（一）-1-（1）。 

（2）利用圓形濾紙進(jìn)行層析（環(huán)形展開或徑向展開）。 分別用圓形慢速、中速、快速定性濾紙進(jìn)行試驗(yàn)，并對(duì)比試驗(yàn)的效果。除更換展開劑之外，操作方法同（一）-1-（2）。 五、拓展實(shí)驗(yàn) 

用粉筆對(duì)菠菜中的色素進(jìn)行柱層析分離。選擇幾片新鮮的菠菜葉，放在乙醇溶液中，輕輕研磨獲得提取液，在提取液中豎直放置一枝白粉筆。經(jīng)一段時(shí)間后，觀察現(xiàn)象。 六、問(wèn)題與討論  

1、在濾紙上作點(diǎn)樣標(biāo)記選用的是鋼筆還是鉛筆？試解析原因。 

2、根據(jù)你在以上各次紙上層析實(shí)驗(yàn)中的操作條件（包括層析混和物、展開劑、顯色劑、濾紙的選擇、展開方法等）及實(shí)驗(yàn)效果（包括混和物分離的時(shí)間、分開后的顏色和相對(duì)位置等），列表（自行設(shè)計(jì)）整理實(shí)驗(yàn)記錄，對(duì)比總結(jié)兩種展開方法的優(yōu)缺點(diǎn)，分析選擇出較佳的實(shí)驗(yàn)條件。你認(rèn)為做好紙上層析實(shí)驗(yàn)應(yīng)注意哪些事項(xiàng)？ 

3、根據(jù)你自己實(shí)驗(yàn)的體會(huì)，對(duì)中學(xué)化學(xué)課本中所述紙上層析實(shí)驗(yàn)的步驟和操作方法提出你的看法。 

4、本實(shí)驗(yàn)把顯色劑加在展開劑中，對(duì)實(shí)驗(yàn)效果有無(wú)影響？（可進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證）。 5、你認(rèn)為在中學(xué)紙上層析實(shí)驗(yàn)時(shí)，還可采用其它哪些層析混和物、展開劑、顯色劑、更為簡(jiǎn)便易行并得到良好的效果。